ПЦР – полимеразная цепная реакция. С помощью метода ПЦР в лабораторной медицине стало возможно в короткие сроки достоверно определять возбудителей различных заболеваний.

О молекулярно-биологических методах исследования

- экстракция (очистка) нуклеиновых кислот из биологического материала;
- амплификация, то есть процесс накопления копий генетического материала – собственно ПЦР;
- детекция, то есть идентификация продукта амплификации.

ПЦР-исследование состоит из трёх основных этапов:

Дерматофиты (дерматомицеты) – облигатно патогенные плесени, обладающие выраженной кератинолитической активностью. Заболевания, вызываемые дерматофитами относятся к группе поверхностных микозов, являясь наиболее частой причиной этих заболеваний. За более подробной информации о дерматофитах и вызываемых ими заболеваниях рекомендуем посетить наш «Читальный зал».

ПЦР-РВ (полимеразная цепная реакция в «реальном времени») – одна из наиболее распространённых модификаций метода ПЦР, основанная на получении сигнала от флуоресцентных меток при каждом цикле увеличения копий генетического материала. Метод позволяет увеличить специфичность классической ПЦР и сократить сроки проведения.

Выявление ДНК дерматофитов методом ПЦР-РВ

Группа наборов реагентов АмплиПрайм® позволяет выявлять ДНК дерматофитов в образцах кожи и её придатков (ногтевых пластин и волос) методом ПЦР-РВ. На текущий момент зарегистрировано 3 набора реагентов:
1. АмплиПрайм® Дерматофиты (Trichophyton, Epidermophyton, Microsporum). Набор реагентов для выявления ДНК основных групп дерматофитов. Лабораторное исследование назначается врачом при подозрении на дерматофитию (микроспорию, трихофитию и эпидермофитию). Точное определение вида гриба необходимо для определения дальнейшей тактики лечения.
2. АмплиПрайм® Microsporum canis. Набор реагентов для выявления ДНК грибов рода Microsporum. Лабораторное исследование назначается при подозрении на микроспорию и после проведённого лечения с целью оценки элиминации гриба.
3. АмплиПрайм® Trichophyton rubrum / Trichophyton mentagrophytes complex / Trichophyton tonsurans. Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК грибов рода Trichophyton. Лабораторное исследование назначается при наличии достаточных клинических и эпидемиологических оснований подозревать заболевание, вызванное указанными видами, и после проведённого лечения с целью оценки динамики элиминации гриба.

Определяемые виды дерматофитов

Выявляемая группа

Виды

Экологическая ниша

Основной хозяин

Частота встречаемости у человека

T. rubrum complex

T. tonsurans complex

T. mentagrophytes complex

M. canis complex

Epidermophyton

T. rubrum

T. violaceum

Преобладающий

Редкий

Антропофильный

Человек

T. tonsurans

T. equinum

Преимущественный

Редкий

Антропофильный

Зоофильный

Человек

Лошади

T. interdigitale (I-II)

T. mentagrophytes (III-VII)

Преимущественный

Редкий

Антропофильный

Зоофильный

Человек

Грызуны, собаки, лошади, овцы, кролики и другие

T. indotineae (VIII)

Редкий

Антропофильный

Человек

M. canis

M. ferrugineum

M. audouinii

Преимущественный

Редкий

Зоофильный

Антропофильный

Кошки, собаки

Человек

E. floccosum

Единственный

Антропофильный

Человек

T. rubrum – наиболее часто встречающийся вид дерматофитов, ответственный за 80-90% случаев дерматофитий. Встречается во всём мире

T. violaceum – редкий вид дерматофита, эндемичный для Африки, но постепенно проникающий в Европу

T. tonsurans – распространённый во всём мире вид, наиболее часто поражающий волосистую часть кожи головы

T. equinum – наиболее распространённый среди лошадей вид, заражающих людей, контактирующих с ними

T. interdigitale (T. mentagrophytes var. I-II) – распространённый во всём мире вид, поражающий в первую очередь кожу ступней, реже туловища

T. mentagrophytes (T. mentagrophytes var. III-VII) – распространённый вид среди диких животных всего мира, иногда встречающийся у людей, с ними контактировавших

T. indotineae (T. mentagrophytes var. VIII) – эндемичный для Индии вид, быстро проникающий в Европу. Важная особенность –устойчивость вида к лечению тербинафином и сниженная чувствительность к лечению итраконазолом

M. canis – часто встречающийся у уличных бродячих животных вид, чаще поражающий детей в возрасте до 15 лет

M. ferrugineum – эндемичный для Азии, Африки и Восточной Европы редкий вид дерматофита

M. audouinii – относительной редкий вид, чаще поражающий волосистую часть кожи головы

E. floccosum – распространённый по всему миру вид, чаще поражающий кожу стоп, туловища и складки кожи

Высокая специфичность метода ПЦР-РВ обеспечивается аккуратным подбором специальных меток (праймеров) для диагностики. Для амплификации ДНК дерматофитов наиболее подходящей мишенью являются ITS-фрагменты. Эти участки являются консервативными для целых групп видов, называемых комплексами, что позволяет охватить сразу несколько различных видов при диагностике методом ПЦР-РВ.

Для проведения более специфичной диагностики внутри группы видов существует молекулярно-биологический метод RFLP, позволяющий дифференцировать виды по сайту рестрикции. Однако, этот метод получил значительно меньшее распространение, чем ПЦР-РВ в связи с большими трудовыми и финансовыми затратами, несмотря на меньшую стоимость в сравнении с ДНК-секвенированием. Нецелесообразность внедрения инструмента избыточно высокой точности в клинической практике позволяет рассматривать ПЦР-РВ как наиболее оптимальный метод для диагностики дерматомицетов.

Набор реагентов АмплиПрайм® Дерматофиты:

Пример получаемого результата

Результат

Параметр

ДНК вида не обнаружена

ДНК T. mentagrophytes complex, T. tonsurans

ДНК T. rubrum

ДНК M. canis

ДНК обнаружена

ДНК E. floccosum

ДНК T. tonsurans

ДНК вида не обнаружена

Референсные значения

ДНК вида не обнаружена

Набор реагентов АмплиПрайм® Microsporum canis*:

Результат

Параметр

ДНК M. canis

Референсные значения

ДНК вида не обнаружена

ДНК обнаружена

Набор реагентов АмплиПрайм® Trichophyton rubrum / Trichophyton mentagrophytes complex / Trichophyton tonsurans*:

Результат

Параметр

ДНК T. rubrum

Референсные значения

ДНК вида не обнаружена

ДНК обнаружена, 1,0х10⁵ копий/мл

ДНК T. mentagrophytes complex, T. tonsurans

ДНК вида не обнаружена

*Для проведения экстракции ДНК грибов из биологического материала (чешуек кожи, волос и ногтевых пластин) необходим набор реагентов МагноПрайм® ФАСТ-М.

Все наборы реагентов доступны для заказа на сайте НекстБио.

Наш сайт использует файлы cookie и похожие технологии
для удобства пользователей. Продолжая пользоваться сайтом,
Вы подтверждаете свое согласие на использование cookie